內(nèi)切β1，4葡聚糖酶(Cx)測試盒

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內(nèi)切β1，4葡聚糖酶(Cx)測試盒測定意義：

Cx存在于細菌、真菌和動物體內(nèi)，是纖維素酶系的組份之一，Cx主要作用于非晶態(tài)纖維素和水溶性纖維素衍生物，隨機水解糖苷鍵，將其分解成葡萄糖、纖維二糖、纖維三糖和其他寡聚體。

測定原理：

采用3,5－二硝基水楊酸法測定Cx催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A標準管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

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