α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒

商品詳情：
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒測定意義

α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶。

測定原理

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶生成琥珀酰輔酶、 二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3.血清等液體：直接檢測。

計算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬。

注意事項：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。

肌醇加氧酶ELISA試劑盒 MIOX免費代測試劑

肌醇單磷酶3ELISA試劑盒 IMPA3免費代測試劑

肌醇單磷酶2ELISA試劑盒 IMPA2免費代測試劑

肌醇單磷酶1ELISA試劑盒 IMPA1免費代測試劑

肌氨脫氫酶ELISA試劑盒 SARDH免費代測試劑

饑餓素-O-乙?；D(zhuǎn)移酶ELISA試劑盒 GOAT免費代測試劑

活性依賴性神經(jīng)保護(hù)因子ELISA試劑盒 ADNP免費代測試劑

活性氧物種調(diào)節(jié)因子1ELISA試劑盒 ROMO1免費代測試劑

活化T-細(xì)胞核因子2ELISA試劑盒 NFATC2免費代測試劑

恢復(fù)蛋白ELISA試劑盒 RCVRN免費代測試劑

環(huán)指蛋白39ELISA試劑盒 RNF39免費代測試劑

環(huán)指CCCH-型鋅指蛋白域蛋白1ELISA試劑盒 RC3H1免費代測試劑

環(huán)氧化合物水解酶3ELISA試劑盒 EPHX3免費代測試劑

環(huán)前列腺素受體ELISA試劑盒 PTGIR免費代測試劑

踝蛋白2ELISA試劑盒 TLN2免費代測試劑
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒檸檬(CA)含量測試盒/分光光度法50管/48樣

檸檬(CA)含量測試盒/微量法100管/96樣

檸檬合成酶(CS)測試盒/微板法20T

檸檬合成酶(CS)測試盒/微板法50T

檸檬合酶(CS)測試盒/分光光度法25管/12樣

檸檬合酶(CS)測試盒/分光光度法50管/24樣

檸檬合酶(CS)測試盒/微量法100管/48樣

蘋果合酶(MS)測試盒/分光光度法50管/48樣

蘋果合酶(MS)測試盒/微量法100管/96樣