脫氫酶(DHA)測(cè)試盒

商品詳情：
脫氫酶(DHA)測(cè)試盒測(cè)定意義

脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶，催化底物通過(guò)細(xì)胞色素系統(tǒng)被氧化，釋放的能量供機(jī)體使用，是生物體取得能量的一種方式。

測(cè)定原理

在細(xì)胞呼吸過(guò)程中，氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脫氫酶作用下接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF)，TF呈現(xiàn)紅色，于485nm測(cè)定其吸光值，即得脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品

天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、冰、蒸餾水、甲醇(不允許快遞，請(qǐng)用戶自備)。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。
商品屬性：

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

4. 測(cè)定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A測(cè)定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

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